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引起多肽不稳固的缘故原由
宣布时间:2019-11-27 10:28:56 阅览量:

多肽的不稳固性是其制剂研究中保存的主要问题之一,其缘故原由较多 。但对某一个多肽来说引起不稳固的主要缘故原由并未几 。详细研究外界条件(如PH、温度、光照、氧浓度等)对多肽稳固性的影响有助于设计合理的制剂配方 。只管添加剂稳固多肽的机制还不十分清晰,使用添加剂仍是现在提高多肽制剂稳固性的主要手段之一 。应用CD、DSC中剖析手段可资助快速筛选到合适的添加剂 。

     引起多肽不稳固的缘故原由

     1.脱酰胺反应

    在脱酰胺反应中,Asn/Gln 残基水解形成Asp/Glu 。非酶催化的脱酰胺反应的举行,在Asn-Gly-结构中的酰胺基团更易水解,位于分子外貌的酰胺基团也比分子内部的酰胺基团易水解 。

     2.氧化

     多肽溶液易氧化的主要缘故原由有两种,一是溶液中有过氧化物的污染,二是多肽的自觉氧化 。在所有的氨基酸残基中,Met、Cys和His、Trp、Tyr等最易氧化 。氧分压、温度缓和冲溶液对氧化也都有影响 。因此,多肽可以充N2气或其它惰性气体后,放在低温下生涯;消融时可以用脱气的溶剂举行消融 。

     3.水解

     多肽中的肽键易水解断裂 。由Asp加入形成的肽键比其它肽键更易断裂,尤其是Asp-Pro和Asp-Gly 肽键 。

     4.重排

    多肽中的Asp-Gly 肽键在合成历程中容易爆发重排,同样在纯化和生涯历程中也有重排爆发,只是比例较低 。

     5.形成过失的二硫键

     二硫键之间或二硫键与巯基之间爆发交流可形成过失的二硫键,导致三级结构改变和活性损失 。因此,含有二硫键的多肽需要适当的生涯,在生涯历程中远离还原试剂和巯基试剂,以免二硫键断裂或错配 。

     6.消旋

     除Gly外,所有氨基酸残基的α碳原子都是手性的,易在碱催化下爆发消旋反应 。其中Asp、His及C端的Cys残基最易爆发消旋应 。

     7.β-消除

    β-消除是指氨基酸残基中β碳原子上基团的消除 。Cys、Ser、Thr、Phe、Tyr 等残基都可通过β-消除降解 。在碱性PH下易爆发β-消除,温度和金属离子对其也有影响 。

     8.变性、吸附、群集或沉淀

     变性一样平常都与三级结构以及二级结构的破损有关 。在变性状态,多肽往往更易爆发化学反应,活性难以恢复 。在多肽变性历程中,首先形成中央体 。通常中央体的消融度低,易于群集,形成聚整体,进而形成肉眼可见的沉淀 。

    卵白质的外貌吸附是其贮存、使用历程中遇到的另一个令人头痛的问题,如riL-2在举行灌注时会吸附在管道外貌,造成活性损失 。

 

多肽的生涯

     多肽产品的稳固性不但和多肽的序列有关,很洪流平上也取决于生产工艺,差别的工艺获得的产品稳固性有很大差别,特殊是含有Cys、Gln、Met、Asn、Trp等氨基酸的序列 。

     需要恒久生涯的多肽,应以冻干粉形式存放在含有干燥剂的密封容器内,置于-20°C生涯,-80°C效果更好,可以最大限度地阻止多肽降解 。这种贮存方法可以使多肽可生涯数年,阻止了被细菌降解和氧化,也可以阻止二级结构的形成 。若是序列中含有Cys、Met等易氧化氨基酸,建议充氮气后低温生涯 。关于部分产品,可以加入稳固剂举行生涯 。

     另外,含有二硫键的序列,需要阻止还原试剂或巯基时间的接触,不然易造成二硫键的交流而造成过失二硫键,或二硫键被还原造成二硫键翻开,从而失去生物活性 。


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