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抗原多肽设计和选择的基来源则
宣布时间:2019-11-27 10:26:53 阅览量:

一、抗原多肽设计的基来源则

     为了使爆发的抗体获得最佳效果,仔细地设计抗原多肽是很有须要的,设计应知足一个基本条件:在免疫历程中,该抗原既不会爆发过强的免疫反应,同时又能爆发出对感兴趣的卵白有团结能力的抗体?乖杓剖且桓龊苤卮蟮目翁,有诸多需要注重的细节。凭证我们所积累的履历,有几点要害的基本设计原则可供各人参考: 

     1.确定抗体的用途:新开展一个研究项目,弄清晰所感兴趣的卵白的一些基本特征是很有须要的,特殊是若是知道卵白的结构会对选择抗体易于接触和识别的区域有很大的资助。然而,在没有这样准确的结构信息的情形下,相识研究的用途会影响多肽设计的战略。例如:若是研究重点是集中在卵白的差别区域,如C端或 N端,或在一种特定状态下的卵白,如磷酸化等,那么凭证所需序列设计的多肽和爆发的响应的抗体在应用上应该没有太大的难题,然而,卵白的构象将影响抗体与其识别区域之间的相互作用。这种情形下可能保存的问题是若是在折叠的卵白中,该识别区域被藏在卵白的内部,抗体将无法接触到该区域,则无法爆发相互作用。

     2.识别区域的选择原则:一样平常说来最理想的抗原识别区域应具备亲水、位于卵白外貌和结构上易变形性等特点。由于在大大都的自然情形中,亲水区域倾向于集中在卵白外貌,而疏水区域经常被包裹在卵白内部,同样原理,抗体只能与在卵白外貌发明的识别区域相互作用,而当这些识别区域有足够的结构易变形性而转移到抗体可接触的位置时,将会与抗体间有很高的亲和性。  

     3.一连的与不一连的识别区域:一连的区域是指由一连的氨基酸序列组成的识别区域。大大都抗体是针对一连识别区域的,抗体能与这类区域以很高的亲和力相团结批注这段序列不在卵白内部。不一连的识别区域是代表有一定折叠的一段多肽序列,或是将两段疏散开的多肽连在一起的抗体的识别区域。在某些情形下,针对这样不一连识别区域的抗体也能爆发,只是用来免疫的抗原多肽必需具备与该不一连识别区域相似的二级结构,而序列的长度需要切合相关的要求。

     4.基本建议:为了阻止识别区域隐藏在卵白内部的危害,我们通常建议选择卵白的N,C两头来爆发的响应的抗体。由于在完整的卵白中,N,C两头通常是袒露在卵白外貌的。然而,一定要注重膜卵白的C端疏水性太强,不适相助为抗原。

     5.序列的长度:通常我们建议抗原多肽的序列长度在8-20个氨基酸残基之间,若是太短,就有多肽特异性不强、所爆发的抗体与自然卵白之间的团结能力不敷强的危害;可是,若是序列长度凌驾20,将有可能引入二级结构,所爆发的抗体失去特异性的可能,并且肽链越长,通常合成难度增大,不易获得高纯度的产品。

     6.载体卵白交联的选择

     将载体卵白加在远离抗体识别区域的一端,在序列中没有Cys的情形下在N或C端加上Cys为交联的首选要领。

 

二、抗原多肽选择的基来源则 

     1.尽可能是在卵白外貌

     2.包管该段序列不形成α-螺旋(α-Helix)

     3.N、C端的肽段比中央的肽段更好

     4.阻止卵白内部重复或靠近重复段的序列

     5.阻止同源性太强的肽段

     6.交联可以在N、C两头,选择依据就是交联在对爆发抗体不太主要的一端

     7.序列中不可有太多的Pro,但有一两个Pro有利益,可以使肽链结构相对稳固一些,对爆发特异性抗体有益。


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